金年会金字招牌诚信至上为您提供RFL-6大鼠成纤维细胞的详细培养说明。以下是细胞培养的各个方面，希望能帮助您顺利进行细胞实验。

一、细胞培养条件

细胞名称：RFL-6大鼠成纤维细胞

生长特性：细胞为贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议使用1:2的比例进行传代。

传代情况：每2天更换培养液。

备注：用无菌离心管收集瓶中的培养基，以备对比培养；若对比效果不佳，建议直接使用我们提供的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

当细胞达到良好状态后，请将其灌满完全培养液并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。

收到细胞后，请使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，之后放置于超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，随后进行处理。

通过显微镜观察细胞的生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片的默认为收到的状态良好。

注意：密封培养瓶时，放入培养箱前要将盖子拧松；在传代后，请使用原瓶的完全培养基与自配的培养基进行对比培养。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未超过80%汇合度，请将培养瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，放入37℃、5% CO2孵箱中继续培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代培养，具体步骤如下：

1. 弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml于培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，若细胞大部分变圆并脱落，则立即停药并添加5ml以上完全培养基。
3. 轻轻吹打以确保细胞完全脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬细胞。
4. 按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），并补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后将其放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%的面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，观察至细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞以确保脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（建议配戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后使用5ml完全培养基重悬，接种到T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 次日，使用新鲜完全培养基进行培养。

四、注意事项

在运输过程中，有些细胞可能会脱落，这是正常现象。如果脱落较多，请收集培养液并进行离心处理，然后将沉淀加入胰酶进行处理。再进行重悬及传代分瓶培养。

五、售后条款

金年会金字招牌诚信至上承诺提供优质服务，以下为售后条款：

• 若因运输途中出现问题（如细胞丢失、瓶身破损等），我们将重发。
• 细胞污染问题需在收到产品48小时内提出，核实后可重发。
• 若细胞复苏后状况不佳需提供真实照片，以便确认是否重发。
• 若收到细胞后2天内未告知问题，则视为产品合格。

希望以上信息对您有帮助。如有任何疑问，请随时联系我们。金年会金字招牌诚信至上将竭诚为您服务。