培养基倾注温度的重要知识
1. 合适的倾注温度
培养基倾注的最佳温度约为45℃。在手心中感到温热,但在手背上感觉烫时,基本可以判断培养基的温度为45℃。如果温度过高,将导致凝固时间延长,并且皿盖上会出现大量冷凝水,这将对后续实验产生不利影响。而温度过低则可能在倒板过程中出现培养基部分凝固的现象。
2. 添加成分的注意事项
某些培养基需要添加成分,这些成分在加入之前应先放置至室温,以避免冷液体导致琼脂凝结或形成片状物。
3. 静置时间的控制
大多数实验室会在培养基灭菌后将其放置于水浴或烘箱中,使用时直接倒板。但需注意,培养基的静置时间不应超过4小时,以免琼脂少量凝固,形成絮状析出。
4. 处理已凝固培养基的方法
在实验过程中,若因特殊情况导致未倒板的培养基已凝固,可以通过沸水浴或电磁炉重新加热溶解,但注意不可再次进行灭菌处理。
5. 倾注的准备步骤
温度调节
培养基倾注的适宜温度约为45℃,太高会延长凝固时间,太低会导致部分凝固。
添加成分
添加的成分需提前放至室温,避免影响琼脂的凝结情况。
静置时间
灭菌后应尽量控制静置时间在4小时以内,以保持琼脂的状态。
平板准备
在倒皿前,平皿应保持在35℃~40℃,可在无菌净化台中调整表面干燥度,以避免过度干燥。
倾注量
平板的倾注量一般为18~20mL;若培养时间超过48小时或温度高于40℃,则倾注量可增加至25mL,以防水分蒸发。
避免气泡
倾注时需贴近平皿壁缓慢倒入,避免气泡产生。如有气泡,可轻摇使其移至平板壁上,不影响观察。
混合均匀
每个平板中加入10mL融化的琼脂培养基,迅速摇动混合。
培养
待平板冷却后翻转并置于适宜温度下进行培养。
6. 操作注意事项
整个操作过程中,应特别注意避免污染。使用前需将培养基瓶或试管松动,然后放于滚水或蒸汽浴中加热,避免过热导致变质。同时,消毒的培养皿数量应比待测样品多一个以作为空白对照。
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